最易受非蛋白氮影响的蛋白质含量测定的方法是

发布时间:2025-05-30 13:48:45

双缩脲法和凯氏定氮法是最易受非蛋白氮影响的蛋白质含量测定方法。非蛋白氮主要包括尿素、肌酐、尿酸等含氮化合物,这些物质会干扰蛋白质的真实含量测定,导致结果偏高。

1、双缩脲法:

双缩脲法通过检测肽键与碱性铜溶液反应产生的紫色络合物来测定蛋白质含量。该方法易受非蛋白氮干扰,因为尿素、氨基酸等含氮物质也能与试剂发生类似反应。尤其在检测尿液、组织提取液等样本时,非蛋白氮浓度较高,可能使测定值虚高20%-30%。

2、凯氏定氮法:

凯氏定氮法通过将样品中的有机氮转化为铵盐后测定总氮量。该方法无法区分蛋白氮与非蛋白氮,样本中存在的尿素、氨等含氮代谢产物会被计入总氮值。在测定血液、饲料等复杂样本时,需预先用三氯乙酸沉淀蛋白以排除干扰。

3、紫外分光光度法:

基于蛋白质中酪氨酸和色氨酸的紫外吸收特性进行测定。虽然特异性优于前两种方法,但核酸等具有相似吸收峰的化合物仍可能造成干扰。需配合标准曲线和样本预处理来提高准确性。

4、Lowry法:

结合双缩脲反应和Folin-酚试剂显色测定蛋白质。非蛋白氮虽不直接参与显色,但高浓度尿素会抑制显色反应,导致测定值偏低。适用于较纯净的蛋白质溶液检测。

5、BCA法:

利用二价铜离子在碱性条件下被蛋白质还原的原理。虽然抗干扰能力较强,但样本中存在的还原性物质如谷胱甘肽仍可能影响结果。建议配合蛋白质沉淀步骤消除非蛋白氮影响。

为减少非蛋白氮干扰,建议优先选择特异性高的检测方法,如ELISA或质谱技术。样本预处理时可采用三氯乙酸沉淀、透析或超滤去除小分子含氮化合物。对于临床或科研检测,应建立不同样本类型的校正曲线,定期用标准品验证检测系统。实验室需根据样本特性选择合适方法,并规范操作流程以确保结果准确性。

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