详解查精子抗体选酶联免疫吸附试验

详解查精子抗体选酶联免疫吸附试验

本法用带正电荷的聚氯乙烯微量反应板，将精子抗原吸附到聚氯乙烯固相载体表面，其固相抗原可与待测标本中抗精子抗体结合，并与加进的抗人IgG酶结合物起反应，形成抗原抗体酶结合物，终极在酶底物作用下而显色。

详解查精子抗体选酶联免疫吸附试验

包被液：0.01mol/LpH9.6碳酸钠缓冲液：

Na2CO31.06g

NaHCO30.84g}加双蒸水至1000mL。

缓冲液：0.01mol/LpH7.4PBS：

详解查精子抗体选酶联免疫吸附试验

精子抗原制备：筛选收集精液常规检查正常的精液，用生理盐水反复离心洗涤，尽可能除往精浆，经超声波超声粉碎，10～15min高速离心，吸上清，测定上清液蛋白浓度，将蛋白浓度稀释为3.5～5.0μg/mL，为精子抗原溶液。

反应板包被抗原：将人精子抗原稀释成3.5～5μg/mL，包被液加到聚氯乙烯微量测定板内，每孔100μL，置4℃冰箱过夜。

封闭处理：越日早晨，倾往抗原溶液，用洗涤PBS洗3次，每次5min，每次洗涤后都要将板在纸上拍干，再加进1%的聚乙烯醇溶液200μL封闭，置室温1h后同上法洗涤。

加待测样品：样品用PBS稀释100倍，每孔加进100μL，同时加As-Ab血清及正常童贞血清作分别阳性和阴性对照，置37℃温育1h，同上法洗涤。

加酶结合物：HRP-ProteinA以1∶640稀释，每孔加进100μL，置室温1h，同上洗涤。

酶反应：加新鲜配制的OPD底物溶液，每孔加进50μL，置室温暗处10min，再加10%H2SO4终止液每孔50μL。

结果判定：用酶标测定仪490μm测其OD值，OD值≥2.0时为阳性。