细胞在4°C冻存液中通常可保存24至48小时，具体时间受冻存液成分、细胞类型、密封条件等因素影响。
冻存液中的保护剂如二甲基亚砜或甘油能减缓细胞代谢，短期维持细胞活性。常规实验用细胞系在严格密封的冻存管中，4°C环境可维持基本形态24小时左右，部分耐受性较强的原代细胞可能延长至48小时。但温度波动或冻存液渗透压失衡会加速细胞膜损伤，导致存活率下降。
特殊敏感细胞如神经元或干细胞，4°C保存超过12小时即可能出现不可逆损伤。若冻存液含特殊营养成分或抗氧化剂，可能适当延长保存窗口。需注意反复开盖会导致温度变化和微生物污染风险增加。
长期保存应使用程序降温后转入液氮，短期存放需避免震动和光照。建议在24小时内完成实验或转移至超低温环境，使用前需检测细胞活力和贴壁能力。不同细胞株的耐受性差异较大，可参考相关文献或进行预实验确定最佳时间。